产品名称 | 肝素抗凝血直接PCR试剂盒-防PCR产物污染体系 Blood SuperDirectTM PCR Kit(Heparin)-UNG | ||
货 号 | TP-04221 | TP-04223 | |
规 格 | 200 T | 2000 T | |
价 格 | ￥1,114.00 | ￥7,525.00 | |
| 描 述 | 直接使用肝素抗凝全血作为模板进行PCR扩增，灵敏度高、扩增效率高，增加了UNG防污染体系，杜绝假阳性；试剂盒包含裂解液/PCR Mix | ||
产品介绍
本产品采用独特的PCR缓冲液体系，无需DNA提取或样品处理即可以全血样本为模板进行直接PCR。EDTA、Heparin抗凝全血以及含有血液的采集卡(如Whatman 903®和 FTA®采血卡)均可直接用于PCR扩增鉴定，极大的缩短了检测时间。本试剂盒提供的2× SuperEasyTM Mix具有很强抑制物耐受性，人血作为PCR模板最大加入量可达PCR体系的45%，鼠血的可达20%，可以灵敏的扩增血液样本中基因组和外源目的DNA片段。
2× SuperEasyTM Mix-Heparin包含本公司特有的Foregene D-Taq DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、Taq Reaction Buffer、PCR反应增强剂、优化剂以及稳定剂。
2× SuperEasyTM Mix(UNG)在2× SuperEasyTM Mix的基础上用dUTP替代了dTTP，并同时加入能够降解含有dUTP模板的UNG酶(Uracil-N-glycosylase)。在PCR反应前，利用UNG酶降解含有尿嘧啶的PCR产物，UNG酶对不含有尿嘧啶的模板不会造成任何影响，从而保证扩增的特异性和准确性，防止了大规模基因检测时可能出现的PCR产物污染问题。
D-Taq DNA polymerase是Foregene为直接PCR反应专门研制出的DNA polymerase。D-Taq DNA polymerase对多种PCR反应抑制剂具有极强的的耐受性、在各种复杂反应体系中均能高效扩增痕量的DNA，扩增速度可达2Kb/min，特别适合进行直接PCR反应。
根据所用抗凝剂的不同，该产品分为两个大类：EDTA抗凝全血直接PCR试剂盒系列(Blood SuperDirectTM PCR Kit-EDTA)和Heparin抗凝全血直接PCR试剂盒系列(Blood SuperDirectTM PCR Kit-Heparin)；也可以根据实验需要选择相应的试剂盒。
试剂盒应用
该试剂盒专用于肝素抗凝全血直接PCR鉴定。(包括：人血、鼠血、鸡血、鸟血、牛血、狗血等)。
试剂盒局限性
扩增片段≤1kb；超过1kb，扩增效率下降或者扩增失败。
UNG防PCR产物污染体系得到的PCR产物请勿用于基因克隆或测序。
PCR产物3’末端随机加A尾。
试剂盒内容
2× SuperEasyTM Mix(UNG)-Heparin：在2× SuperEasyTM Mix-EDTA的基础上用dUTP替代了dTTP，并同时加入能够降解含有dUTP模板的UNG酶，从而能够有效防止PCR扩增产物污染。包含福际生物特别改造的D-Taq DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂以及稳定剂等。PCR反应时，只需将适当的抗凝全血、引物、ddH2O添加到相应的2× SuperEasyTM Mix(UNG)-Heparin中即可用于PCR反应。
6× DNA Loading Buffer：该Loading Buffer中不含有SDS。建议在进行琼脂糖凝胶电泳时，配搭使用试剂盒附赠的6× DNA Loading Buffer，以便取得好的电泳结果。切勿使用含有SDS的Loading Buffer，否则在电泳时会在泳道中有一大团拖尾亮光，影响实验结果。
储存条件
全程低温冰盒运输，保证试剂盒处于＜4℃状态。
本试剂盒保存在-20℃。
v 2× SuperEasyTM Mix(UNG)-Heparin，若频繁使用，也可置于4℃短期保存(限10天内用完)。
v 6× DNA Loading Buffer，可置于4℃或-20℃长期保存。
操作流程
说明书
产品文献
MSDS
COA
正对照、待测样本均无条带
Answer
在试剂盒的使用过程中往往会遇到许多问题，比如：没有PCR扩增产物、PCR特异性差等，以下就分别对使用血液直接PCR系列试剂盒可能会遇到的问题进行分析。建议在进行直接PCR的同时设置阳性对照或阴性对照以便后续分析实验结果。
1. PCR反应体系或反应条件不合适。
建议：使用梯度PCR摸索PCR最佳反应条件。
2. PCR试剂保存不当失去活性。
建议：2× SuperEasyTM Mix系列PCR Mix应保存于-20℃，使用时避免反复冻融。若使用频繁，可在4℃短时间存放。
3. 引物设计问题。
建议：尝试重新设计引物进行检查。
正对照有目的条带，待测样本无条带或条带弱
Answer
1. 血液样本保存不当，基因组DNA降解。
建议：抗凝全血可在4℃保存2-8天，需长时间保存可将样本置于在-20℃或-70℃冻存，并避免反复冻融。
2. PCR条件没有使用正确。
建议：请仔细确认2× SuperEasyTM Mix的类型，对应相应的PCR条件进行PCR扩增。
3. 模板加入量不适合。
建议：可在PCR体系10%-30%范围内优化血液加入量；若是扩增血液样本中的病毒或细菌DNA片段，可将模板量增加至30%-40%。
4. PCR循环数不足。
建议：适当增加PCR的循环数，推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂，一般PCR反应要比用纯化的DNA模板多5-10个循环为佳。
非特异性扩增
Answer
1. 退火温度偏低。
建议：适当提高退火温度。或对退火温度做一个梯度摸索。
2. PCR循环数过多。
建议：适当降低循环次数，推荐在35-40循环为佳。
3. 引物浓度偏高。
建议：适量降低引物用量。通常引物终浓度为0.2μM可以得到较好结果。反应性能较差时，可以在0.1-0.5μM范围内调整引物浓度。
4. 模板加入量过多。
建议：将模板加入量控制在10-20%。反应效性能较差时，可以降模板浓度调节到低于10%的范围。
空白对照出现目的条带
Answer
1. 操作工具或试剂污染。
建议：实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。
2. PCR产物污染。
建议：如果实验室检测同类型样本多，最好使用UNG防PCR产物污染系统的试剂盒进行实验。
