产 品 名 称 | 鼠尾直接PCR试剂盒-防PCR产物污染体系 Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG | ||
货 号 | TP-01341 | TP-01343 | |
规 格 | 200 T | 2000 T | |
价 格 | ￥1,114.00 | ￥7,525.00 | |
| 描 述 | 快速的从鼠尾、小鼠组织样本中释放出基因组DNA，用于PCR反应，适合快速大规模基因检测；增加了UNG防污染体系，杜绝假阳性。 试剂盒包含裂解液/PCR Mix | ||
产品介绍
本产品采用独特的裂解缓冲液体系可以快速的从小鼠鼠尾、鼠耳、肌肉等组织样本中释放出基因组DNA，用于PCR反应，因此特别适合大规模基因检测。
裂解缓冲液释放基因组DNA过程在65℃条件下10-30 min内完成，不需要其他去蛋白、RNA等的过程，即可将释放出的微量DNA作为模板进行PCR反应。
2× M1-PCR EasyTM Mix具有很强的PCR反应抑制物耐受性，能以待测样本的裂解液为模板，进行高效特异性扩增。该试剂包含Foregene D-Taq DNAPolymerase、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR优化剂和稳定剂。与裂解缓冲液配合使用能够快速简便地对样品进行检测，并具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点。
2× M1-PCR EasyTM Mix(UNG)在2× PCR EasyTM Mix的基础上用dUTP替代了dTTP，并同时加入能够降解含有dUTP模板的UNG酶(Uracil-N-glycosylase)。在PCR反应前，利用UNG酶降解含有尿嘧啶的PCR产物，UNG酶对不含有尿嘧啶的模板不会造成任何影响，从而保证扩增的特异性和准确性，防止了大规模基因检测时可能出现的PCR产物污染问题。
D-Taq DNA polymerase是Foregene为直接PCR反应专门研制出的DNA polymerase。D-Taq DNA polymerase对多种PCR反应抑制剂具有极强的的耐受性、在各种复杂反应体系中均能高效扩增痕量的DNA，扩增速度可达2Kb/min，特别适合进行直接PCR反应。
试剂盒应用
适用范围：小鼠鼠尾、鼠耳、肌肉等组织。
样本裂解释放的DNA：仅用作PCR模板。
试剂盒可用于以下用途：转基因型鉴定、动物基因分型等。
试剂盒局限性
扩增片段≤1kb；超过1kb，扩增效率下降或者扩增失败。
UNG防PCR产物污染体系得到的PCR产物请勿用于基因克隆或测序。
PCR产物3’末端随机加A尾。
试剂盒内容
Buffer MP：提供小鼠组织裂解反应所需的环境。
Foregene Protease Plus：在裂解缓冲液的环境下，裂解鼠尾或小鼠组织，释放基因组DNA。
2× M1-PCR EasyTM Mix(UNG)：在2× M1-PCR EasyTMMix的基础上用dUTP替代了dTTP，并同时加入能够降解含有dUTP模板的UNG酶，从而能够有效防止PCR扩增产物污染。包含福际生物特别改造的D-Taq DNA Polymerase、UDG、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂以及稳定剂等。PCR反应时，只需将适当的裂解混合液、引物、ddH2O添加到2× M1-PCR EasyTM Mix(UNG)中即可用于PCR反应。
6× DNA Loading Buffer：该Loading Buffer中不含有SDS。建议在进行琼脂糖凝胶电泳时，配搭使用试剂盒附赠的6× DNA Loading Buffer，以便取得好的电泳结果。切勿使用含有SDS的Loading Buffer，否则在电泳时会在泳道中有一大团拖尾亮光，影响实验结果。
储存条件
全程低温冰盒运输，保证试剂盒Part I、Part II处于＜4℃状态。
本试剂盒Part I保存在2-8℃。
v 试剂Buffer MP，在干燥条件下，可保存12个月；如需保存更长时间可置于2–8℃。
v 试剂Foregene Protease Plus，具有独特配方，为保证其活性和稳定性，请保存于4℃，保存时间为12个月。
v 试剂6× DNA Loading Buffer，可置于4℃或-20℃长期保存。
本试剂盒Part II保存在-20℃。
v 试剂2× M1-PCR EasyTM Mix(UNG)，在-20℃条件下可保存12个月；若频繁使用，也可置于4℃短期保存(限10天内用完)。
操作流程
说明书
产品文献
MSDS
COA
正对照、待测样本均无条带
Answer
在试剂盒的使用过程中往往会遇到许多问题，比如：没有PCR扩增产物、PCR特异性差等，以下就分别对使用鼠尾直接PCR系列试剂盒可能会遇到的问题进行分析。建议在进行直接PCR的同时设置阳性对照或阴性对照以便后续分析实验结果。
1. PCR反应体系或反应条件不合适。
建议：使用梯度PCR摸索PCR最佳反应条件。
2. PCR试剂保存不当失去活性。
建议：2× PCR Mix应保存于-20℃，使用时避免反复冻融。若使用频繁，可在4℃短时间存放。
3. 引物设计问题。
建议：尝试重新设计引物进行检查。
正对照有目的条带，待测样本无条带或条带弱
Answer
1. PCR条件没有使用正确。
建议：请仔细确认2× PCR Mix的类型，对应相应的PCR条件进行PCR扩增。
2. 加入组织裂解液过量。
建议：增大反应体系，或减少裂解液的用量。
3. 样本裂解混合液保存不当或保存时间过久，DNA基因组已经降解。
建议：裂解混合液液可在4℃保存2-3天，尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。
4. 模板加入量不适合。
建议：在反应体系10-20%范围内优化模板加入量。反应效性能较差时，可以降模板浓度调节到低于10%的范围。
5. PCR循环数不足。
建议：适当增加PCR的循环数，推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂，一般PCR反应要比用纯化的DNA模板多5-10个循环为佳。
非特异性扩增
Answer
1. 退火温度偏低。
建议：适当提高退火温度。或对退火温度做一个梯度摸索。
2. PCR循环数过多。
建议：适当降低循环次数，推荐在35-40循环为佳。
3. 引物浓度偏高。
建议：适量降低引物用量。通常引物终浓度为0.2μM可以得到较好结果。反应性能较差时，可以在0.1-0.5μM范围内调整引物浓度。
4. 模板加入量过多。
建议：将模板加入量控制在10-20%。反应效性能较差时，可以降模板浓度调节到低于10%的范围。
空白对照出现目的条带
Answer
1. 操作工具或试剂污染。
建议：实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。
2. 样本间交叉污染。
建议：每个取样器只对一个样本使用；或取完一个样本后，将取样器刃口浸入2%的次氯酸钠溶液中，反复涮洗，然后用干净的纸巾擦干残液。
3. PCR产物污染。
建议：如果实验室检测同类型样本多，最好使用UNG防PCR产物污染系统的试剂盒进行实验。
