产 品 名 称 | 斑马鱼直接PCR试剂盒-防PCR产物污染体系 Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG | ||
货 号 | TP-01421 | TP-01423 | |
规 格 | 200 T | 2000 T | |
价 格 | ￥1,114.00 | ￥7,525.00 | |
| 描 述 | 快速的从斑马鱼等淡水鱼类组织、尾鳍或鱼卵样本中释放出基因组DNA，用于PCR反应，适合快速大规模基因检测；增加了UNG防污染体系，杜绝假阳性。 试剂盒包含裂解液/PCR Mix | ||
产品介绍
本产品采用独特的裂解缓冲液体系可以快速的从斑马鱼等淡水鱼类组织、尾鳍或鱼卵样本中释放出基因组DNA，用于PCR反应，因此特别适合大规模基因检测。
裂解缓冲液释放基因组DNA过程在65℃条件下10-30 min内完成，不需要其他去蛋白、RNA等的过程，即可将释放出的微量DNA作为模板进行PCR反应。
2× PCR EasyTM Mix具有很强的PCR反应抑制物耐受性，能以待测样本的裂解液为模板，进行高效特异性扩增。该试剂包含Foregene D-Taq DNAPolymerase、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR优化剂和稳定剂。与裂解缓冲液配合使用能够快速简便地对样品进行检测，并具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点。
2× PCR EasyTM Mix(UNG)在2× PCR EasyTM Mix的基础上用dUTP替代了dTTP，并同时加入能够降解含有dUTP模板的UNG酶(Uracil-N-glycosylase)。在PCR反应前，利用UNG酶降解含有尿嘧啶的PCR产物，UNG酶对不含有尿嘧啶的模板不会造成任何影响，从而保证扩增的特异性和准确性，防止了大规模基因检测时可能出现的PCR产物污染问题。
D-Taq DNA polymerase是Foregene为直接PCR反应专门研制出的DNA polymerase。D-Taq DNA polymerase对多种PCR反应抑制剂具有极强的的耐受性、在各种复杂反应体系中均能高效扩增痕量的DNA，扩增速度可达2Kb/min，特别适合进行直接PCR反应。
试剂盒应用
适用范围：斑马鱼等淡水鱼类。
样本裂解释放的DNA：仅用作PCR模板。
试剂盒可用于以下用途：转基因型鉴定、动物基因分型等。
试剂盒局限性
扩增片段≤1kb；超过1kb，扩增效率下降或者扩增失败。
UNG防PCR产物污染体系得到的PCR产物请勿用于基因克隆或测序。
PCR产物3’末端随机加A尾。
试剂盒内容
Buffer FP：提供斑马鱼组织裂解反应所需的环境。
Foregene Protease：在裂解缓冲液的环境下，裂解斑马鱼组织，释放基因组DNA。
2× PCR EasyTM Mix(UNG)：在2× PCR EasyTM Mix的基础上用dUTP替代了dTTP，并同时加入能够降解含有dUTP模板的UNG酶，从而能够有效防止PCR扩增产物污染。包含福际生物特别改造的D-Taq DNA Polymerase、UDG、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂以及稳定剂等。PCR反应时，只需将适当的裂解混合液、引物、ddH2O添加到2× PCR EasyTM Mix(UNG)中即可用于PCR反应。
6× DNA Loading Buffer：该Loading Buffer中不含有SDS。建议在进行琼脂糖凝胶电泳时，配搭使用试剂盒附赠的6× DNA Loading Buffer，以便取得好的电泳结果。切勿使用含有SDS的Loading Buffer，否则在电泳时会在泳道中有一大团拖尾亮光，影响实验结果。
储存条件
全程低温冰盒运输，保证试剂盒Part I、Part II处于＜4℃状态。
本试剂盒Part I保存在2-8℃。
v 试剂Buffer FP，在干燥条件下，可保存12个月；如需保存更长时间可置于2–8℃。
v 试剂Foregene Protease，具有独特配方，为保证其活性和稳定性，请保存于4℃，保存时间为12个月。
v 试剂6× DNA Loading Buffer，可置于4℃或-20℃长期保存。
本试剂盒Part II保存在-20℃。
v 试剂2× PCR EasyTM Mix(UNG)，在-20℃条件下可保存12个月；若频繁使用，也可置于4℃短期保存(限10天内用完)。
操作流程
说明书
产品文献
MSDS
COA
正对照、待测样本均无条带
Answer
在试剂盒的使用过程中往往会遇到许多问题，比如：没有PCR扩增产物、PCR特异性差等，以下就分别对使用斑马鱼直接PCR系列试剂盒可能会遇到的问题进行分析。建议在进行直接PCR的同时设置阳性对照或阴性对照以便后续分析实验结果。
1. PCR反应体系或反应条件不合适。
建议：使用梯度PCR摸索PCR最佳反应条件。
2. PCR试剂保存不当失去活性。
建议：2× PCR EasyTM Mix或2× PCR EasyTM Mix(UNG)应保存于-20℃，使用时避免反复冻融。若使用频繁，可在4℃短时间存放。
3. 引物设计问题。
建议：尝试重新设计引物进行检查。
正对照有目的条带，待测样本无条带或条带弱
Answer
1. PCR条件没有使用正确。
建议：请仔细确认2× PCR Mix的类型，对应相应的PCR条件进行PCR扩增。
2. 加入组织裂解液过量。
建议：增大反应体系，或减少裂解液的用量。
3. 样本裂解混合液保存不当或保存时间过久，DNA基因组已经降解。
建议：裂解液可在4℃保存2-3天，尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。
4. 模板加入量不适合。
建议：在反应体系10-20%范围内优化模板加入量。反应效性能较差时，可以降模板浓度调节到低于10%的范围。
5. PCR循环数不足。
建议：适当增加PCR的循环数，推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂，一般PCR反应要比用纯化的DNA模板多5-10个循环为佳。
非特异性扩增
Answer
1. 退火温度偏低。
建议：适当提高退火温度。或对退火温度做一个梯度摸索。
2. PCR循环数过多。
建议：适当降低循环次数，推荐在35-40循环为佳。
3. 引物浓度偏高。
建议：适量降低引物用量。通常引物终浓度为0.2μM可以得到较好结果。反应性能较差时，可以在0.1-0.5μM范围内调整引物浓度。
4. 模板加入量过多。
建议：将模板加入量控制在10-20%。反应效性能较差时，可以降模板浓度调节到低于10%的范围。
空白对照出现目的条带
Answer
1. 操作工具或试剂污染。
建议：实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。
2. 样本间交叉污染。
建议：每个取样器只对一个样本使用；或取完一个样本后，将取样器刃口浸入2%的次氯酸钠溶液中，反复涮洗，然后用干净的纸巾擦干残液。
3. PCR产物污染。
建议：如果实验室检测同类型样本多，最好使用UNG防PCR产物污染系统的试剂盒进行实验。
