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肝素抗凝血直接PCR试剂盒—防PCR产物污染体系

无需进行费时而昂贵的DNA纯化,无需预处理,直接使用全血作为PCR模板。

体系扩增能力强,可以灵敏的检测出血液中基因组和外源目的DNA片段。

2× SuperEasyTM Mix(UNG)-Heparin血液耐受度高:人血可达45%,鼠血可达20%。

样本全封闭式操作,无需担心样本污染和PCR结果假阳性。

防污染PCR体系2× SuperEasyTM Mix(UNG),有效消除由PCR产物所引起的污染,保证扩增的特异性和准确性。

产品名称

肝素抗凝血直接PCR试剂盒-防PCR产物污染体系

Blood SuperDirectTM PCR Kit(Heparin)-UNG

货  号

TP-04221

TP-04223

规  格

200 T

2000 T

价  格

1,114.00

7,525.00

描  述

直接使用肝素抗凝全血作为模板进PCR扩增,灵敏度高、扩增效率高,增加了UNG防污染体系,杜绝假阳性;试剂盒包含裂解液/PCR Mix

产品介绍

本产品采用独特的PCR缓冲液体系,无需DNA提取或样品处理即可以全血样本为模板进行直接PCREDTAHeparin抗凝全血以及含有血液的采集卡(Whatman 903® FTA®采血卡)均可直接用于PCR扩增鉴定,极大的缩短了检测时间。本试剂盒提供的2× SuperEasyTM Mix具有很强抑制物耐受性,人血作为PCR模板最大加入量可达PCR体系的45%,鼠血的可达20%,可以灵敏的扩增血液样本中基因组和外源目的DNA片段。

2× SuperEasyTM Mix-Heparin包含本公司特有的Foregene D-Taq DNA PolymerasedNTPsMgCl2Taq Reaction BufferPCR反应增强剂、优化剂以及稳定剂。

2× SuperEasyTM Mix(UNG)2× SuperEasyTM Mix的基础上用dUTP替代了dTTP,并同时加入能够降解含有dUTP模板UNG(Uracil-N-glycosylase)。在PCR反应前,利用UNG酶降解含有尿嘧啶的PCR产物,UNG酶对不含有尿嘧啶的模板不会造成任何影响,从而保证扩增的特异性和准确性,防止了大规模基因检测时可能出现的PCR产物污染问题。

D-Taq DNA polymeraseForegene为直接PCR反应专门研制出的DNA polymeraseD-Taq DNA polymerase对多种PCR反应抑制剂具有极强的的耐受性、在各种复杂反应体系中均能高效扩增痕量的DNA,扩增速度可达2Kb/min,特别适合进行直接PCR反应。

根据所用抗凝剂的不同,该产品分为两个大类:EDTA抗凝全血直接PCR试剂盒系列(Blood SuperDirectTM PCR Kit-EDTA)Heparin抗凝全血直接PCR试剂盒系列(Blood SuperDirectTM PCR Kit-Heparin);也可以根据实验需要选择相应的试剂盒。


试剂盒应用

该试剂盒专用于肝素抗凝全血直接PCR鉴定。(包括:人血、鼠血、鸡血、鸟血、牛血、狗血等)


试剂盒局限性

扩增片段≤1kb;超过1kb,扩增效率下降或者扩增失败。

UNGPCR产物污染体系得到的PCR产物请勿用于基因克隆或测序。

PCR产物3’末端随机加A尾。



试剂盒内容

2× SuperEasyTM Mix(UNG)-HeparinSuperEasyTM Mix-EDTA的基础上用dUTP替代了dTTP,并同时加入能够降解含有dUTP模板的UNG酶,从而能够有效防止PCR扩增产物污染。包含福际生物特别改造的D-Taq DNA PolymerasedNTPsMgCl2反应缓冲液PCR反应增强剂、优化剂以及稳定剂等。PCR反应时,只需将适当的抗凝全血、引物、ddH2O添加到相应的SuperEasyTM Mix(UNG)-Heparin中即可用于PCR反应。

6× DNA Loading Buffer:该Loading Buffer中不含有SDS。建议在进行琼脂糖凝胶电泳时,配搭使用试剂盒附赠的6× DNA Loading Buffer,以便取得好的电泳结果。切勿使用含有SDSLoading Buffer,否则在电泳时会在泳道中有一大团拖尾亮光,影响实验结果。


储存条件

全程低温冰盒运输,保证试剂盒处于<4状态。

本试剂盒保存在-20

v  2× SuperEasyTM Mix(UNG)-Heparin,若频繁使用,也可置于4短期保存(10天内用完)

v  6× DNA Loading Buffer,可置于4-20长期保存。


操作流程

血液直接PCR



  • 正对照、待测样本均无条带

    Answer

    在试剂盒的使用过程中往往会遇到许多问题,比如:没有PCR扩增产物、PCR特异性差等,以下就分别对使用血液直接PCR系列试剂盒可能会遇到的问题进行分析。建议在进行直接PCR的同时设置阳性对照或阴性对照以便后续分析实验结果。

    1.    PCR反应体系或反应条件不合适。

    建议:使用梯度PCR摸索PCR最佳反应条件。

    2.    PCR试剂保存不当失去活性。

    建议:2× SuperEasyTM Mix系列PCR Mix应保存于-20,使用时避免反复冻融。若使用频繁,可在4短时间存放。

    3.   引物设计问题。

    建议:尝试重新设计引物进行检查。


  • 正对照有目的条带,待测样本无条带或条带弱

    Answer

    1.   血液样本保存不当,基因组DNA降解。

    建议:抗凝全血可在4保存2-8天,需长时间保存可将样本置于在-20-70冻存,并避免反复冻融

    2.    PCR条件没有使用正确。

    建议:请仔细确认2× SuperEasyTM Mix的类型,对应相应的PCR条件进行PCR扩增。

    3.    模板加入量不适合

    建议:可在PCR体系10%-30%范围内优化血液加入量;若是扩增血液样本中的病毒或细菌DNA片段,可将模板量增加至30%-40%

    4.    PCR循环数不足。

    建议:适当增加PCR的循环数,推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂,一般PCR反应要比用纯化的DNA模板多5-10个循环为佳。


  • 非特异性扩增

    Answer

    1.   退火温度偏低。

    建议:适当提高退火温度。或对退火温度做一个梯度摸索。

    2.    PCR循环数过多。

    建议:适当降低循环次数,推荐在35-40循环为佳。

    3.    引物浓度偏高。

    建议:适量降低引物用量。通常引物终浓度为0.2μM可以得到较好结果。反应性能较差时,可以在0.1-0.5μM范围内调整引物浓度。

    4.    模板加入量过多。

    建议:将模板加入量控制在10-20%。反应效性能较差时,可以降模板浓度调节到低于10%的范围。


  • 空白对照出现目的条带

    Answer

    1.   操作工具或试剂污染。

    建议:实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。

    2.    PCR产物污染。

    建议:如果实验室检测同类型样本多,最好使用UNGPCR产物污染系统的试剂盒进行实验。


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